應客戶們對年前產(chǎn)品預購的要求，今日開始逐漸安排發(fā)貨，具體內(nèi)容公司業(yè)務員會及時聯(lián)系。新年的開始中，公司技術(shù)專員為ELISA檢測試劑盒新手入門的使用技術(shù)報告做出一番整理，在這里分享給您，供參考。

◎ELISA方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法：檢測抗原(體)的常見方法，應用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原，不能測 小分子半抗原)。
  2.間接法：檢測抗體的方法，利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體。
  3.競爭法：檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標抗原就越少，顯色越淺，二者呈負相關(guān)。
◎操作注意
  ① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  ② 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
  ③ 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
◎elisa試劑盒質(zhì)控分析
  1.人員培訓內(nèi)容包括：①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識；④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗。
  2.基本了解
    ① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
    ② 特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
    ③ 酶標記免疫活性物質(zhì)，進行信號放大；
    ④ 有二步溫育反應二次洗滌過程；
    ⑤ 靈敏度特異性相對較高。
    ⑥ 局限性：只能檢測到ng水平
    ⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；
    ⑧ ELISA檢測試劑盒線性范圍窄(一個數(shù)量級)；
    ⑨ 存在"HD-HOOK"效應。

ELISA試劑盒試驗原理：

ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將已知濃度的標準品和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

ELISA試劑盒操作注意事項：

試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀釋過后的標準品應丟棄，不可保存。

實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

 血清

操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g    離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿

EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

細胞上清液

1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

組織勻漿

將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

保存

如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍